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时间:2020-03-13 01:58 作者:admin 点击:
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在目前的防疫措施中,快速检测病毒是一项重要环节,为了找到在尽可能短时间内检测出新冠病毒COVID-19的方法,科学家们已经发布了数篇研究。

其中,实时荧光PCR (RT-PCR)法是检测COVID-19病毒核酸的一种临床标准。RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应,其原理是,提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。

近日,发布在medrxiv上的一篇论文中表示,科学家们开发了一种更快速、更方便的检测病毒核酸的方法——RT-LAMP法(逆转录环介导等温扩增法)。在63℃等温条件下,一步进行RNA逆转录和核酸扩增,30分钟即可得到结果,同时检测ORF1ab基因、E基因和N基因。

(论文截图)

论文中写道,由于ORF1ab基因具有很强的特异性,N基因具有很强的敏感性,这种方法可以保证病毒检测的敏感性和特异性。

(用RT-LAMP法检测COVID-19病毒,图源论文)

RT-LAMP法检测208份临床标本的灵敏度与RT-PCR法相近,特异性为99%。该论文所提到的RT-LAMP法具有扩增快、操作简便、检测简便等优点,有助于COVID-19的快速、可靠的临床诊断。此外,检测结果可以通过肉眼可见的颜色变化来直接判断,不需要专用仪器。

这篇论文由Weihua Yang, Xiaofei Dang,Qingxi Wang等人发布,涉及机构包括济南市医学微生物学重点实验室、山东第一医科大学附属济南市中心医院临床试验室、山东省第二肿瘤靶分子重点实验室、山东大学附属济南市中心医院等。

并不“新鲜”的RT-LAMP法

其实,RT-LAMP法并不是这篇论文所独有。RT-LAMP是一种将环介导等温扩增(LAMP)以及反转录相结合,直接检测出RNA的技术,当它与反应混合物中的pH指示剂耦合时,人们可以通过颜色的变化知道检测结果。

此前,2月25日,由沈阳化工大学应用生物学研究所所长尹秀山博士团队和美国密歇根皇家橡树博蒙特Michael B Chancellor团队分别发布在medRxiv上的两篇论文也使用该技术快速检测病毒。这两种方法不仅操作简单、能在现场使用,并且可以在45分钟内出检测结果。

能够使用该方法检测的病毒有很多,包括鸭I型肝炎病毒、A组轮状病毒、番茄斑萎病毒、脑脊液结核分歧杆菌、人季节性流感病毒等。

环介导等温扩增(LAMP)技术的特点是针对靶基因的特定领域设计特异性引物,利用链置换DNA聚合酶在恒温条件下保温几十分钟,即可实现核酸的扩增。LAMP法不需要模板的热变性、长时间温度循环、繁琐的电泳、紫外观察等过程,在食品微生物检测及临床医学上传染性疾病、转基因食品和胚胎性别坚定等特性的诊断上都具有独特的应用价值。

参考文献:

http://www.biodiscover.com/news/research/736081.html

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.03.02.20030130v2.full.pdf